L' extraction de l ' ADN dans un laboratoire

Les différentes étapes impliquées dans l’extraction d’ADN sont les suivantes:

1. Lyse cellulaire. la première étape implique la lyse cellulaire pour accéder à l’ADN. Celle-ci peut être accomplie par des méthodes physiques ou chimiques.
2. L’élimination des lipides. L’élimination ou la séparation des lipides membranaires et des débris cellulaires se fait généralement à l’aide de détergents comme le sodium dodecyl sulfate et par centrifugation.
3. L’élimination des protéines de l’extrait cellulaire. La dénaturation des protéines est effectuée à l’aide d’une protéase telles que la pronase ou la protéinase K. Aprés quoi, les protéines dénaturées sont séparées de l’extrait cellulaire.
4. L’élimination de l’ARN. L’élimination de l’ARN est effectuée par addition de RNase qui dégrade rapidement l’ARN en ribonucléotides. Cette étape est généralement optionnelle dans chaque kit.
5. La précipitation/agrégation/élution de l’ADN.                                                                                                                                               Les méthodes d’extraction de l’ADN communément utilisées dans les kits d’extraction ou de purification de l’ADN sont:                                                                                                                            L' extraction organique. Cette méthode a été très largement utilisée et est une méthode d’extraction de l’ADN conventionnelle. Dans la première étape, les cellules sont lysées et les débris cellulaires éliminés par centrifugation. Dans un deuxième temps, les protéines sont dénaturées à l’aide d’une protéase. Dans la méthode d’extraction organique, après dénaturation, les protéines sont éliminées à l’aide de solvants organiques                                   Technologie utilisant la silice. C’est une méthode largement utilisée dans les kits courants. L’ADN est absorbé spécifiquement sur la membrane/billes/particules de silice en présence de certains sels et à un pH particulier. Les contaminants cellulaires sont éliminés par les différentes étapes de lavage. L ’ADN est finalement élué dans un tampon faible en sel ou tampon d’élution. Des sels chaotropes sont inclus pour aider à la dénaturation de protéines et l’extraction d’ADN                                                                                   Séparation magnétique. Cette méthode est basée sur la liaison réversible de l’ADN à une surface solide/billes/ particules magnétiques qui ont été recouvertes d’un anticorps liant l’ADN ou d’un groupe fonctionnel qui interagit spécifiquement avec l’ADN. Après liaison de l’ADN, les billes sont séparées des autres composants cellulaires contaminants, lavées et finalement l’ADN purifié est élué par extraction à l’éthanol.                                                            Méthode d’échange d’anion. Cette méthode est basée sur l’interaction spécifique entre des phosphates négativement chargés de l’acide nucléique et les molécules de surface positivement chargées du substrat. L’ADN se lie spécifiquement au substrat en présence de faible concentration de sels, les contaminants sont éliminés par les étapes de lavage utilisant un tampon à concentration faible ou moyenne en sels, et l’ADN purifié est élué à l’aide d’un tampon à concentration élevée en sels